Um método novo e sensível foi desenvolvido para a determinação de etimicina (ETM) utilizando pré-coluna de derivatização (PCD) com 9-fluorenilmetilcloroformiato (FMOC-Cl) por separação de fase reversa e subsequente detecção por fluorescência. As condições PCD foram todas otimizadas para o menor limite de detecção. A separação cromatográfica foi efetuada em uma coluna Agilent XDB-C8 a 25 ºC, velocidade de fluxo de 1,0 mL min-1 e fase móvel acetonitrila/água (87:13, v/v). O derivativo etimicina-FMOC-Cl foi monitorado por detecção de fluorescência a λexcitação 265 nm e λemissão 315 nm. Neomicina, um composto de estrutura similar ao ETM foi usado como padrão interno. A avaliação estatística do método foi examinada, mostrando-se preciso e exato com um intervalo de linearidade de 0,038-9,69 µg mL-1 (r > 0,9994). Os estudos de precisão intra- e inter-dia mostraram boa reprodutividade com desvio padrão médio (R.S.D.) menor que 5%, e recuperação de 97,80-100,09 % (n = 3). O limite de detecção (LOD) e o limite inferior de quantificação (LLOQ) em plasma foram 0,01 e 0,02 µg mL-1, respectivamente. Um volume de 50 µL de plasma foi suficiente para detecção de etimicina. O método estabelecido fornece um método bionalítico confiável para a farmacocinética de etimicina em plasma de rato.

A new and sensitive method was developed for the determination of the etimicin (ETM) using precolumn derivatization (PCD) with 9-fluorenylmethyl chloroformate (FMOC-Cl) by a reversed phase separation and subsequent fluorescence detection. The PCD conditions were fully optimized towards the lowest limit of detection. The chromatographic separation was carried out on an Agilent XDB-C8 column at 25 ºC using a constant flow rate of 1.0 mL min-1 and mobile phase of acetonitrile/water (87:13, v/v). The etimicin-FMOC-Cl derivative was monitored by fluorescent detection at λexcitation 265 nm and λemission 315 nm. Neomycin (NMC), a similar base structure compound with ETM, was used as an internal standard. The statistical evaluation of the method was examined and the method was found to be precise and accurate with a linearity range of 0.038-9.69 µg mL-1 (r > 0.9994). The intra- and inter-day precision studies showed good reproducibility with relative standard deviation (R.S.D.) less than 5%, and the relative recovery was 97.80-100.09 % (n = 3). The limit of detection (LOD) and lower limit of quantification (LLOQ) in plasma were 0.01 and 0.02 µg mL-1, respectively. A volume of 50 µL of plasma was sufficient for the determination of etimicin. The established method provides a reliable bioanalytical method to carry out etimicin pharmacokinetics in rat plasma.